高效液相色譜儀（HPLC,HighPerformanceLiquidChromatography）如何選型？浣熊儀器儀器工程師告訴您幾招，輕松搞定高效液相色譜儀選型難題。

　　高效液相色譜儀的選型，歸結(jié)起來就是2個問題：如何確定高效液相色譜儀的配置？如何選擇高效液相色譜儀的品牌？

　　今天我們就來談?wù)勥@個問題，如何確定高效液相色譜儀的配置？

　　高效液相色譜儀可以分為5大部分：高壓輸液泵單元、進樣器單元、分離單元、檢測器單元、色譜數(shù)據(jù)處理單元，下面我們來逐一分析，談?wù)劯咝б合嗌V儀的選型細則。

　　1、高壓輸液泵單元的配置選型：

　　高效液相色譜儀的高壓輸液方式分為等度方式、梯度方式兩大類別。

　　等度方式：在色譜分析過程中，流動相中各個組分的比例不隨時間發(fā)生變化，例如某次分析過程中流動相中甲醇與水的比例是50：50一直保持不變，那么這種就叫做等度方式。

　　梯度方式：在色譜分析過程中，流動相中各個組分的比例隨時間發(fā)生發(fā)生變化，例如某次分析過程中，隨著時間的推移，流動相中其中一種（或幾種）溶劑比例逐漸增大、另一種或幾種溶劑的比例逐漸減少，最終那么這種輸液方式就叫做梯度方式。

　　相應(yīng)以上2種流動相輸液方式，有等度泵和梯度泵這兩種配置方式。

　　等度泵：一般采用單泵來作為高壓輸液泵單元。

　　梯度泵：又分為高壓梯度、低壓梯度。

　　高壓梯度：常用的是二元高壓梯度泵，也有三元高壓梯度泵；我們通常所說的雙泵，就是指“二元高壓梯度泵”。有幾元高壓，則必須有幾臺泵；高壓梯度泵單元，除了幾臺高壓泵之外，還需要有配套的流動相混合裝置（通常采用混合器）；由于是高壓混合的梯度方式，所以通常不太會產(chǎn)生氣泡，脫氣機通?？梢圆挥门鋫?。

　　低壓梯度：與高壓梯度“有幾元高壓就用幾臺泵”所不同的是，低壓梯度只需要一臺高壓泵，但是在高壓泵的前端，需要加上比例閥（有的公司稱為低壓梯度單元），通過比例閥來調(diào)節(jié)幾種不同流動相進入高壓泵的比例，從而實現(xiàn)梯度淋洗。因為低壓下各種不同溶劑混合時可能產(chǎn)生吸熱或放熱，所以對于低壓梯度泵單元來說，流動相脫氣機與混合器一樣，。

　　高效液相色譜儀（HPLC）的高壓輸液泵單元的選型，主要是根據(jù)所檢測項目方法的所需來定，方法中流動相輸液是等度方式，那么等度泵（單泵）即可滿足需求；如果方法中規(guī)定需要用到梯度淋洗輸液方式，那么就需要選擇梯度泵了。

　　在一些有HPLC分析方法開發(fā)任務(wù)的單位，為了滿足將來可能的方法開發(fā)需要，即便暫時不需要梯度泵，也往往會配備梯度泵以利拓展方法。

　　2、進樣器單元的配置選型

　　高效液相色譜儀（HPLC）的進樣器單元，有2種配置可供選擇：手動進樣器、自動進樣器。

　　手動進樣器：無論是國產(chǎn)還是進口，例如沃特世（Waters）、島津（Shimadzu）、安捷倫（Agilent），世界上絕大多數(shù)公司均采用美國Rheodyne公司生產(chǎn)的六通進樣閥作為高效液相色譜儀的手動進樣閥。

　　自動進樣器：自動進樣器的優(yōu)點就是，能顯著提高設(shè)備使用效率、減少人力成本。例如一個公司的HPLC使用部門，可以在下午下班之前，把未做完的50個樣品都放進自動進樣器內(nèi)，然后設(shè)定分析程序、儀器清洗程序、關(guān)機程序，然后所有的人都可以下班，無需派人值守，第二天早上打印圖譜、上報數(shù)據(jù)即可。

　　3、分離單元（高效液相色譜柱）

　　色譜柱是高效液相色譜儀的核心部件。

　　色譜法最核心的機制就是把樣品中各個組分進行有效分離，而實現(xiàn)分離靠的就是色譜柱。

　　色譜柱選擇時需要考慮四大參數(shù)：固定相類型（填料種類）、柱長、柱內(nèi)徑、填料粒度。

　　固定相類型：目前主要有硅膠基質(zhì)的ODS(碳十八)、氨基、氰基、苯基、硅膠等色譜柱，以及高分子聚合物的固定相填料。目前ODS(碳十八)應(yīng)用廣泛，高效液相色譜法大約有80%分離采用的就是ODS(碳十八)填料。

　　柱長：色譜柱的長度越長，分離效果越好，但是背壓也就越大、柱子價格就會越貴。目前柱長應(yīng)用較多的是375px、500px、625px這三個長度，尤其以625px最多。

　　柱內(nèi)徑：其它幾個柱參數(shù)不變的情況下，高效液相色譜柱的內(nèi)徑越小，分離度越好（分離度越高），但是柱負載量越小。常用柱內(nèi)徑是3.9mm、4.6mm、6.0mm，尤其以4.6mm。

　　填料粒徑：根據(jù)色譜法的速率理論，填料粒徑越小，分離效果越好；但是填料粒度越小，在同樣的流動相輸送流速下，對于高效色譜儀高壓泵的背壓也就越大，對于高壓泵的加壓能力、密封性能也就要求越高。高效液相色譜儀一般采用3微米、5微米或10微米的填料粒徑，而3微米以下粒徑的填料，通常應(yīng)用于超高效液相色譜儀。高效液相色譜法應(yīng)用最多的是5微米粒徑的填料。

　　分離單元還有另外兩個問題需要掂量：是否需要配預(yù)柱（保護柱）、是否需要配柱溫箱。

　　預(yù)柱（保護柱）：預(yù)柱（保護柱）的存在，會加大色譜死體積，會降低柱效，所以除非樣品特別臟、或有特別多的高分子物質(zhì)會堵塞分析柱，否則盡量不用預(yù)柱（保護柱）。

　　柱溫箱：因為高效液相色譜法對于溫度的些微波動并不特別敏感，除了一些對于柱溫穩(wěn)定性要求特別高的分離，高效液相色譜法很多情況下并不需要配置柱溫箱。當(dāng)然，如果采購預(yù)算足夠多，安裝柱溫箱確實能有更好的色譜出峰時間重復(fù)性。

　　4、檢測器單元的配置選型

　　高效液相色譜儀的檢測器有很多種，常見的是紫外檢測器，還有示差檢測器、熒光檢測器、二極管陣列檢測器、蒸發(fā)光散射檢測器等等。

　　紫外檢測器：是一種選擇性檢測器，幾乎是所有HPLC檢測器里面價格便宜、應(yīng)用廣泛的一種檢測器，適合于測定有紫外吸收的物質(zhì)（帶苯環(huán)、雜環(huán)、雙鍵叁鍵的物質(zhì)）。紫外檢測器的特點是靈敏度很高、適用性很廣泛。

　　示差檢測器：是一種通用型檢測器，但是它的靈敏度低于紫外檢測器，而且它對于流速比較敏感。示差檢測器主要用來對一些沒有紫外吸收的物質(zhì)進行檢測，例如糖類、高分子聚合物等等。

　　熒光檢測器：僅僅適合于在紫外光照射下能發(fā)射熒光的物質(zhì)，例如維生素等檢測。高效液相色譜儀的熒光檢測器的特點是靈敏度高、但適用范圍較窄。

　　二極管陣列檢測器：是紫外檢測器的一個變種，二極管陣列檢測器的特點是靈敏度較紫外檢測器低、但是能做三維圖譜，特別適合于醫(yī)藥研發(fā)類的應(yīng)用。

　　蒸發(fā)光散射檢測器：蒸發(fā)光散射檢測器是一種新型的通用型檢測器，未來的趨勢是可以替代示差檢測器等來檢測無紫外吸收的物質(zhì)，但是目前價格非常昂貴。

　　5、色譜數(shù)據(jù)處理單元

　　高效液相色譜儀的色譜數(shù)據(jù)處理單元，有數(shù)據(jù)處理機和色譜工作站兩種，隨著電腦的普及與應(yīng)用，色譜數(shù)據(jù)處理機已經(jīng)漸漸被淘汰，目前以色譜工作站為主流。

　　色譜工作站又分為可否反控兩大類。

　　可反控工作站：不但能記錄與處理色譜數(shù)據(jù)，而且可以反控高效液相色譜儀的各個組成單元。因為一些控制指令接口與數(shù)據(jù)傳輸?shù)募夹g(shù)性問題，可反控工作站一般是各大儀器廠商自行研發(fā)與設(shè)計的，互相之間不能通用。

　　不可反控工作站：僅能記錄與處理色譜數(shù)據(jù)，不可反控高效液相色譜儀。不可反控工作站通常是外掛式的，包含硬件和軟件兩大部分，硬件部分主要是一個A/D轉(zhuǎn)換器，將高效液相色譜儀傳輸來的模擬信號轉(zhuǎn)換成數(shù)字信號，再輸進計算機；軟件部分主要功能就是把硬件傳輸來的數(shù)字信號轉(zhuǎn)換成圖譜并進行積分計算等操作。

　　不可反控工作站的優(yōu)點是通用性強，但是不可反控儀器、不便進行自動化操作。

　　二極管陣列檢測器必須要用特殊的三維色譜軟件。

　　綜上所述，搞清楚了高效液相色譜儀的高壓輸液泵單元、進樣器單元、分離單元、檢測器單元、色譜數(shù)據(jù)處理單元的選型考量細則，那么我們才可以在盡量節(jié)約經(jīng)費的情況下，選到我們所需要的儀器配置了。