反相色譜（Reverse Phase Chromatography，RPC）是一種基于樣品成分在不同親水性條件下在固定相和流動相之間的相互作用來實現(xiàn)分離和定量的色譜技術(shù)。它在醫(yī)藥、化工、生物等領(lǐng)域有廣泛的應(yīng)用。

原理：

RPC的固定相通常是非極性的，如C18（十八烷基）鍵合硅膠，而流動相則是極性的，如水和有機(jī)溶劑（如甲醇、乙腈等）的混合物。樣品通過色譜柱時，根據(jù)溶質(zhì)的疏水性（即親水性）差異進(jìn)行分離。疏水性越大的溶質(zhì)在固定相上的保留時間越長，因此洗脫時間越晚；而親水性越大的溶質(zhì)在流動相中的移動速度越快，因此洗脫時間越早。

影響因素：

固定相：固定相的種類和鏈長會影響樣品的保留值。例如，C18固定相適用于大多數(shù)化合物，包括非極性和極性小分子。

流動相組成：流動相的極性越大，溶質(zhì)的分配系數(shù)越大，洗脫時間越短。通常采用降低流動相極性（水含量）的線性梯度洗脫法。

溫度：溫度+，流動相黏度-，流動速度+，且流動相與固定相之間的傳質(zhì)速度+，使分辨率增加。但溫度上升也會導(dǎo)致疏水性作用減弱，因此升高溫度時需要考慮目標(biāo)物質(zhì)的熱穩(wěn)定性。

樣品的分子結(jié)構(gòu)：樣品的極性越弱，疏水性越強(qiáng)，保留值越大。

色譜柱的選擇：

色譜柱的選擇對RPC的分離效果至關(guān)重要。常用的色譜柱包括C18、C8、苯基柱等，它們適用于不同的化合物和分離需求。例如，C18色譜柱是通用型色譜柱，適用于多種化合物的分析。

應(yīng)用：

RPC在蛋白質(zhì)、肽、氨基酸、核酸、甾類、脂類、脂肪酸、糖類、植物堿等含有非極性基團(tuán)的各種物質(zhì)的分離中都有應(yīng)用。例如，它可以用于合成寡核苷酸的快速與高分離度分離等。